CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION

La chromatographie d’exclusion ou de diffusion est une technique qui consiste à séparer les molécules d’une solution en filtrant ces molécules de taille différente dans un gel poreux. Puisque ce type de chromatographie est physique, il n’est pas basé sur l’affinité des molécules avec la phase mobile ou stationnaire. Il est plutôt basé sur la taille des macromolécules en solution. Les grosses molécules dont le diamètre est supérieur à celui des pores sont exclues et sont donc éluées les premières. Parler des équations ?? Bien que le principe de cette méthode soit connu depuis le début des années 50, ce n'est qu'à partir de 1959 qu'elle a été développée commercialement par Porath et Flodin. L’appareillage pour la chromatographie d’exclusion est semblable à celui de de «HPLC». Le solvant utilisé dans cette expérience dit être dégazé avant d’entrer dans le système de pompage. Le système de pompage travaille à haute pression pour faire sortir le solvant à un débit très constant. Généralement, ce débit est de l’ordre de 1mL/min. Ensuite, le solvant passe par l’injecteur pour permettre l’introduction des échantillons. Tous les composants de l’appareillage sont reliés par des connexions à faible volume mort, c’est-à-dire le volume de phase mobile externe aux granules du gel dans la colonne et reliés à des tubes capillaires pour rendre les pics plus précis. Il existe différents types de gels dans les colonnes. Les plus fréquents sont les gels hydratés, dont le Séphadex et le Sépharose. EXPLIQUER? Ce sont des polysaccarides de type dextran. Il existe aussi les gels permanents qui ajoutent des effets d’absorption au tamisage des molécules. Ces gels permanents sont des minéraux ou des copolymères organiques. Ainsi, pour analyser les molécules, elles devront passer dans un détecteur. Il sera ensuite possible de déterminer la courbe de distribution des masses moléculaires et d’évaluer les masses moléculaires moyennes sur à des procédures