Chapitre 9 : Les aspects technologiques en biologie moléculaire
La biologie moléculaire est impliquée dans tous les domaines de la biologie, donc il faut connaître certaines techniques. En technologie moléculaire, on peut manipuler l’ADN par les plasmides (ou vecteurs de clonage). Ça veut dire utiliser la réplication : on reproduit in vitro cette réplication de l’ADN pour obtenir des grandes quantités d’un
ADN d’intérêt, pour isoler, cloner et manipuler un acide nucléique.
On est capable …afficher plus de contenu…

Ces propriétés de réplication sont intrinsèques aux séquences du vecteur, si on apporte des séquences, on ne change pas le vecteur de clonage. Cette réplication conduit à l’amplification de l’ADN.
1) Les plasmides
Ces vecteurs de clonages appelés plasmides sont des séquences naturelles particulières :
- petits ADN circulaires capables de vivre dans la bactérie de manière indépendante du chromosome. C’est important car le chromosome ne se réplique qu’une seule fois par cycle cellulaire, alors que les plasmides vont se répliquer de manière autonome donc un grand nombre de fois par …afficher plus de contenu…

C’est la technique de clonage.
D’un point de vue pratique, il est nécessaire que l’ADN soit double brin car les plasmides sont eux-mêmes double brin, l’ADN plasmidique est circulaire donc pas d’extrémité, alors que l’ADN d’intérêt peut être circulaire ou linéaire.
Pour l’insérer dans le plasmide, il va falloir ouvrir le plasmide. On le découpe à l’aide de « ciseaux moléculaires » qui sont des enzymes de restrictions. Elles vont couper des séquences d’ADN, et une fois qu’on a ouvert le plasmide, on va coller l’ADN d’intérêt à l’aide d’une « colle » qui est la ligase.
Préparation des enzymes de restrictions :
Ce sont les enzymes qui permettent d’ouvrir un ADN double brin. Une enzyme de restriction ne reconnait