Chapitre 2 : Biologie moléculaire Principe, technique et applications

1.4 enzyme de restriction
1.4.1
1.4.2
1.4.3
1.4.4
1.4.5 Applications
1.4.5.1 Vecteurs

Plasmide (ADN bactérien) pBR322 : vecteur de 4363 pb (très petite tailles) composé de 2 sites de restriction uniques situés dans les gènes de résistance (Amp, Tet).
Figure 1
Plasmide bon vecteur car petite taille, 2 sites de résistance qui comprennent un seul site de de restriction chacun.
1.4.5.2 Carte de restrictions

Une carte de restriction est une représentation localisant sur un ADN les sites de restrictions, après les avoir soumis à une digestion enzymatique.
La cartographie de restriction a pour objectif de reconstituer la séquence d’ADN en réordonnant les fragments issus de diverses digestions : simple, doubles ou multiples.
La constituion de cette carte de restrictions s’appuie sur les résultats obtenus à partir de digestions partielles ou complète de la séquence
En simple digestion (digestion partielle) : une proportion des sites de restrictions restent intact.
En digestion multiples( double ou triple digestion) : tous les sites de digestion sont coupés.
Figure 2

Exemple 1 : On fait réagir un brin d’ADN linéaire( pas donné dans l’exo à nous de le définir) avec 2 enzyme de restriction afin de rechercher les sites de coupures de ces 2 enzymes et de construire la carte de restriction.
La digestion terminé, chaque lot d’ADN est soumis à une électrophorèse qui sépare les fragments d’ADN selon leurs tailles.
Figure 3
Questions qui peuvent-être posée :
1) Qu’elle est la longueur du brin d’ADN ?
2) Combien le fragment de l’ADN digéré possède-t-il de sites de restrictions (coupures) pour les enzymes 1 et 2 ?
3) Utiliser les données de restrictions pour établir la carte de restriction.

1) C’est la somme des différents segments obtenus lors de l’une des simple digestion.
Enzyme 1 = 8+6+3
=17 Kb
2) L’ADN est linéaire, donc :

Enzyme 1-> on a 3 segments donc 2 sites de restrictions
Enzyme 2-> On